| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 1100-1 | ||||
Resumo:As lipases representam uma estratégia promissora para a terapia de reposição enzimática, oferecendo benefícios no tratamento de distúrbios metabólicos. No entanto, a utilização efetiva dessas enzimas tem sido desafiada pelas características de muitas lipases microbianas, que são alcalinas, instáveis ou inativadas no ambiente digestivo, sob a ação de sais biliares e proteases digestivas. Neste contexto, a lipase de B. lata LBBIO-BL02 tem se mostrado uma alternativa promissora. Estudos conduzidos em nosso grupo de pesquisa possibilitaram o estabelecimento de condições ideais para a produção dessa enzima em um meio de cultivo de baixo custo, utilizando resíduos de frigorífico como fonte de carbono e nitrogênio inorgânico. Além disso, desenvolvemos um método alternativo inédito de purificação da lipase em passo único (Patente BR 102019006621-0). A caracterização bioquímica mostra que a lipase da cepa LBBIO-BL02 é uma enzima tão potente quanto as lipases gástrica e pancreática humanas, ao mesmo tempo em que combina propriedades dessas duas enzimas, atuando em variações de pH encontradas no trato gastrointestinal humano e em uma ampla variedade de substratos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade da lipase de B. lata LBBIO-BL02 em fluido duodenal simulado (FDS), em diferentes concentrações de substrato e sais biliares. A produção da enzima foi realizada em fermentação submersa, em condições previamente estabelecidas. A atividade da enzima foi realizada em FDS, composto de lecitina de soja, glicerol, cloreto de cálcio (CaCl2), cloreto de sódio (NaCl), tripsina, taurodeoxicolato de sódio (NaTDC) e óleo de oliva como substrato, incubação de 30 min, 180 rpm, 37 °C e pH 8,0. Os ensaios foram realizados em triplicata e os ácidos graxos liberados calculados contra um branco sem enzima por titulação com NaOH 0,05 mol/L. A concentração de substrato foi estudada entre 10 e 37% (v/v). Os ensaios foram realizados em triplicata e os ácidos graxos liberados calculados contra um branco sem enzima por titulação com NaOH 0,05 mol/L. A concentração de substrato foi estudada entre 10 e 37% (v/v). Variando-se a concentração de substrato obteve-se atividade enzimática entre 0,10 e 0,12 U/mL de enzima, sendo possível concluir que o aumento isolado da concentração de substrato no intervalo estudado não proporcionou diferença na atividade enzimática. As lipases são enzimas que atuam sobre substratos insolúveis em água e a emulsificação destes interfere na atividade enzimática. Dessa forma, o resultado obtido pode ser devido a saturação da enzima e pela concentração insuficiente de sal biliar nestes experimentos. Baseado nesses conceitos, outro ensaio realizado foi a variação na concentração de sais biliares numa faixa entre 4 e 16 mmol/L. Surpreendentemente, a lipase de B. lata não só manteve atividade na presença de sais biliares como também sua atividade foi intensificada, apresentando o dobro da atividade observada com 4 mmol/L nas faixas de 8 e 16 mmol/L. Com esse aumento de atividade na presença de concentrações crescentes de sais biliares, provavelmente devido à ação emulsificante do sal, a enzima contraria o descrito para a maioria das lipases microbianas. Esses resultados indicam que a lipase de B. lata LBBIO-BL02 destaca-se fortemente como uma candidata para o uso eficiente como um suplemento digestivo sem perda da eficiência lipolítica. Palavras-chave: Enzima digestivas, Hidrólise de lipídios, Terapia de reposição enzimática Agência de fomento:FAPESP | |||||